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细胞转染实验失败了,怎么解救?
细胞转染在细胞生物学和分子生物学中占据重要地位,广泛用于基因与蛋白功能研究,成为实验室工作中的常规技术手段之一。常见的异常结果是细胞大量死亡、转染效率不高、重复实验不稳定。如何找到症结所在,让实验顺利进行,就显得比较重要。
 

01 细胞大量死亡

可能原因

解决办法

细胞状态不佳

选择生长旺盛的细胞进行转染实验

核酸纯度不够或内毒素过高

采用高质量核酸与去内毒素的核酸

目的蛋白对细胞的毒性

尝试进行再设计

转染试剂过多

1、降低转染试剂的量
2、转染后4-6h换液

污染

排查污染源或重新复苏细胞

抗生素存在

特别是阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性,使抗生
素可以进入细胞,降低细胞的活性,导致转染效率降
低,可降低抗生素浓度或不使用抗生素

营养不足

如果无血清条件下转染的,要根据状态及时补充营养

 

02 转染效率不高

 

可能原因

解决办法

转染试剂不合适

1、选择专门的转染试剂; 2、转染试剂保存不合适,导致试剂变质,保存温度一般是2-8℃。

细胞密度不合适

优化调整合适的铺板密度,同时要考虑不同实验目的也会影响的铺板密度。

核酸-转染试剂复合物过少

排查污染源或重新复苏细胞

核酸与转染试剂比例不合适

充分混匀,逐滴加入

核酸-转染试剂复合物孵育时间调整

保障细胞铺板密度与均一性

检测时间不合适

选择合适的时间点进行转染效率的观测,一般mRNA表达水平在24~72 h,蛋白表达水平在48~96 h

03 重复实验不稳定

可能原因

解决办法

细胞状态不佳

选择生长旺盛的细胞进行转染实验

营养成分不稳定

其中血清的影响因素最大,宜选用同批次血清

污染

排查污染源或重新复苏细胞

配置核酸-转染试剂复合物操作不当

充分混匀,逐滴加入

细胞铺板差异

保障细胞铺板密度与均一性

 
可以把细胞转染从开始设计到最终的检测,大致可以由6个步骤组成:核酸准备、试剂选择、细胞铺板、转染操作、细胞培养、效果检测。每一步都会影响最终的结果。当出现异常结果时,就需要具体分析原因,才能避免进一步的失败,浪费宝贵的时间与材料。
 

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以下仅展示部分论文:

[1] Liu R, Yang J, Yao J, et al. Optogenetic control of RNA function and metabolism using engineered light-switchable RNA-binding proteins. Nat Biotechnol. 2022;40(5):779-786. doi:10.1038/s41587-021-01112-1(IF=68.164)

[2] Luo J, Yang Q, Zhang X, et al. TFPI is a colonic crypt receptor for TcdB from hypervirulent clade 2 C. difficile. Cell. 2022;185(6):980-994.e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010 (IF=66.85)

[3] Zhou J, Chen P, Wang H, et al. Cas12a variants designed for lower genome-wide off-target effect through stringent PAM recognition. Mol Ther. 2022;30(1):244-255. doi:10.1016/j.ymthe. 2021.10.010 (IF=12.910)

[4] Chen S, Cao X, Zhang J, Wu W, Zhang B, Zhao F. circVAMP3 Drives CAPRIN1 Phase Separation and Inhibits Hepatocellular Carcinoma by Suppressing c-Myc Translation. Adv Sci (Weinh). 2022;9(8):e2103817. doi:10.1002/advs.202103817 (IF=17.694)

[5] Zhang Y, Yu X, Sun R, et al. Splicing factor arginine/serine-rich 8 promotes multiple myeloma malignancy and bone lesion through alternative splicing of CACYBP and exosome-based cellular communication. Clin Transl Med. 2022;12(2):e684. doi:10.1002/ctm2.684 (IF=11.492)

[6] Qin J, Cai Y, Xu Z, et al. Molecular mechanism of agonism and inverse agonism in ghrelin receptor. Nat Commun. 2022;13(1):300. Published 2022 Jan 13. doi:10.1038/s41467-022-27975-9 (IF=17.681)

[7] Tang X, Deng Z, Ding P, et al. A novel protein encoded by circHNRNPU promotes multiple myeloma progression by regulating the bone marrow microenvironment and alternative splicing. J Exp Clin Cancer Res. 2022;41(1):85. Published 2022 Mar 8. doi:10.1186/s13046-022-02276-7(IF=12.658)

[8] Yang X, Wang X, Xu Z, et al. Molecular mechanism of allosteric modulation for the cannabinoid receptor CB1 [published online ahead of print, 2022 May 30]. Nat Chem Biol. 2022;10.1038/s41589-022-01038-y. doi:10.1038/s41589-022-01038-y (IF=16.174)

[9] Xie F, Su P, Pan T, et al. Engineering Extracellular Vesicles Enriched with Palmitoylated ACE2 as COVID-19 Therapy. Adv Mater. 2021;33(49):e2103471. doi:10.1002/adma. 202103471 (IF=30.849)

[10] Liang Y, Lu Q, Li W, et al. Reactivation of tumour suppressor in breast cancer by enhancer switching through NamiRNA network. Nucleic Acids Res. 2021;49(15):8556-8572. doi:10.1093/nar/gkab626 (IF=16.9)

[11] Fan Y, Wang J, Jin W, et al. CircNR3C2 promotes HRD1-mediated tumor-suppressive effect via sponging miR-513a-3p in triple-negative breast cancer. Mol Cancer. 2021;20(1):25. Published 2021 Feb 2. doi:10.1186/s12943-021-01321-x (IF=27.403)

[12] Dai L, Dai Y, Han J, et al. Structural insight into BRCA1-BARD1 complex recruitment to damaged chromatin. Mol Cell. 2021;81(13):2765-2777.e6. doi:10.1016/j.molcel.2021.05.010 (IF=17.97)

[13] Zhang K, Wang A, Zhong K, et al. UBQLN2-HSP70 axis reduces poly-Gly-Ala aggregates and alleviates behavioral defects in the C9ORF72 animal model. Neuron. 2021;109(12):1949-1962.e6. doi:10.1016/j.neuron.2021.04.023 (IF=17.17)

[14] Liang Y, Lu Q, Li W, et al. Reactivation of tumour suppressor in breast cancer by enhancer switching through NamiRNA network. Nucleic Acids Res. 2021;49(15):8556-8572. doi:10.1093/nar/gkab626 (IF=16.9)

[15] Li T, Chen X, Qian Y, et al. A synthetic BRET-based optogenetic device for pulsatile transgene expression enabling glucose homeostasis in mice. Nat Commun. 2021;12(1):615. Published 2021 Jan 27. doi:10.1038/s41467-021-20913-1 (IF=14.92)

[17] Gu C, Wang Y, Zhang L, et al. AHSA1 is a promising therapeutic target for cellular proliferation and proteasome inhibitor resistance in multiple myeloma. J Exp Clin Cancer Res. 2022;41(1):11. Published 2022 Jan 6. doi:10.1186/s13046-021-02220-1 (IF=11.161)

[18] Zhou Y, Li D, Luo J, et al. Sulfated glycosaminoglycans and low-density lipoprotein receptor mediate the cellular entry of Clostridium novyi alpha-toxin. Cell Res. 2021;31(8):935-938. doi:10.1038/s41422-021-00510-z (IF=25.617)

[19] Luo Q, Wu X, Zhao P, et al. OTUD1 Activates Caspase-Independent and Caspase-Dependent Apoptosis by Promoting AIF Nuclear Translocation and MCL1 Degradation. Adv Sci (Weinh). 2021;8(8):2002874. Published 2021 Feb 8. doi:10.1002/advs.202002874 (IF=15.84)

[20] Yan F, Huang C, Wang X, et al. Threonine ADP-Ribosylation of Ubiquitin by a Bacterial Effector Family Blocks Host Ubiquitination. Mol Cell. 2020;78(4):641-652.e9. doi:10.1016/j.molcel.2020.03.016 (IF=17.97)

[21] Sun X, Peng X, Cao Y, Zhou Y, Sun Y. ADNP promotes neural differentiation by modulating Wnt/β-catenin signaling. Nat Commun. 2020;11(1):2984. Published 2020 Jun 12. doi:10.1038/s41467-020-16799-0 (IF=14.911)

[22] Yang X, Wang H, Xie E, et al. Rewiring ERBB3 and ERK signaling confers resistance to FGFR1 inhibition in gastrointestinal cancer harbored an ERBB3-E928G mutation. Protein Cell. 2020;11(12):915-920. doi:10.1007/s13238-020-00749-z (IF=14.872)

[23] Zou Y, Wang A, Shi M, et al. Analysis of redox landscapes and dynamics in living cells and in vivo using genetically encoded fluorescent sensors. Nat Protoc. 2018;13(10):2362-2386. doi:10.1038/s41596-018-0042-5 (IF=13.490)

[24] Hao H, Hu S, Chen H, et al. Loss of Endothelial CXCR7 Impairs Vascular Homeostasis and Cardiac Remodeling After Myocardial Infarction: Implications for Cardiovascular Drug Discovery. Circulation. 2017;135(13):1253-1264. doi:10.1161/CIRCULATIONAHA.116.023027 (IF=18.881)

 
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5981cc万洲国际转染试剂产品目录

应用场景

名称

货号

规格

细胞类型:贴壁/悬浮

核酸类型:DNAsiRNA

Hieff Trans® 脂质体核酸转染试剂

40802ES02

0.5 mL

40802ES03

1.0 mL

40802ES08

5×1 mL

细胞类型:贴壁/悬浮
核酸类型:DNA

磷酸钙法细胞转染试剂

40803ES70

200 T

用途:病毒感染、DNA转染

聚凝胺(10 mg/ml

40804ES76

500 μL

40804ES86

5×500 μL

细胞类型:悬浮
核酸类型:DNAsiRNA

Hieff Trans® 悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂

40805ES02

0.5 mL

40805ES03

1.0 mL

40805ES08

5×1 mL

细胞类型:贴壁/悬浮
核酸类型:siRNAmiRNA

Hieff Trans® siRNA/miRNA体外转染试剂

40806ES01

0.1 mL

40806ES02

0.5 mL

40806ES03

1.0 mL

细胞类型:贴壁/悬浮
核酸类型:DNAsiRNAmiRNA

Hieff Trans® 通用型转染试剂

40808ES02

0.5 mL

40808ES03

1 mL

40808ES08

5×1 mL

细胞类型:贴壁/悬浮
核酸类型:mRNA

Hieff Trans® mRNA转染试剂

40809ES01

0.1 mL

40809ES03

1 mL

细胞类型:贴壁/悬浮
核酸类型:DNA

PEI转染试剂MW25000

40815ES03

1 g

40815ES08

5×1 g

细胞类型:贴壁/悬浮
核酸类型:DNA

线性PEI转染试剂(速溶型)MW40000

40816ES02

100 mg

40816ES03

1 g

细胞类型:293
核酸类型:DNA
用途:AAV/LV载体研发与工艺开发

Hieff Trans® PEI转染试剂

40820ES04

1.5 mL

40820ES10

10 mL

40820ES60

100 mL

细胞类型:293

核酸类型:DNA

用途:AAV/LV载体大规模生产

Hieff Trans® PEI Transfection Reagent-GMP

40821ES10

10 mL

40821ES60

100 mL

40821ES80

1 L

 

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