双荧光素酶报告基因检测数据集
双荧光素酶报告基因检测试剂盒因其具有灵敏度高、无细胞内源性表达干扰等优势,现已被广泛用于基因表达调控的研究中。该系统包括萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase)和海肾荧光素酶(Renilla luciferase),通过和底物的相互作用检测基因的表达。通常海肾荧光素酶相对更多地被用作转染效率的内参,以消除细胞数量和转染效率的差异。该双报告检测系统的实验结果为萤火虫荧光素酶的荧光值和海肾荧光素酶的荧光值的比值。
双报告检测方法的应用十分广泛,如调控元件功能研究、转录因子研究、信号转导通路、miRNA调控等。通常把靶基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游,与海肾TK载体共转染至细胞中,以研究启动子的强弱或转录因子对启动子的作用;或把3’-UTR区克隆在luciferase的下游,以研究miRNA对目的基因的调控作用。
该试剂盒主要应用于动物细胞中,当然也有很多小伙伴用于植物中,小翌这边收集到了一些原始数据与大家分享。在这里分成动物细胞和植物两个part。以下案例均使用双荧光素酶报告基因检测试剂盒完成(Yeasen,CAT:11402)。











7、实验目的:验证miR-375与A基因 3’UTR是否结合从而抑制A基因的表达。
实验结果:







实验结果:


实验结论:烟草双荧光素酶检测结果显示,含有pBD-TF效应载体的荧光值显著高于阴性对照pBD和阳性对照(pBD-VP16)荧光值。结果表明TF是活性很高的转录激活因子。


实验结论:转录因子X能结合到基因B的启动子区域并激活其表达(p<0.005),但是无法结合到基因A的启动子区域。(Luc数值偏低,要确保研磨彻底,并加大裂解液的使用量。)


