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上新 | 告别繁琐!小鼠BMDC诱导因子套装实力登场,细胞分化更高效、更稳定!
PART.1

树突状细胞——免疫世界的“哨兵

BMDC(Bone Marrow-Derived Dendritic Cells),中文名称是骨髓来源的树突状细胞。在免疫系统中,树突状细胞作为功能最强大的专职抗原呈递细胞,是连接先天免疫与适应性免疫的“桥梁”。而小鼠骨髓来源树突状细胞,因其可大量获取、易于体外操作,成为了探索免疫应答机制、开发新型疫苗与免疫疗法的黄金标准模型。

 

图1.DC-T 细胞相互作用[1]

 

PART.2

细胞因子套装如何解决您的核心痛点?

从原始的小鼠骨髓单核细胞,到培养出成熟、稳定、高纯度的BMDC,这条“分化之路”充满挑战。其中,细胞因子的质量、活性与配比,是决定实验成败的关键所在。

 

传统的BMDC诱导方法,常常需要研究者单独购买多种细胞因子,自行摸索配比比例与操作流程,不仅流程繁琐,更面临着批次间差异大、细胞得率与纯度不稳定等诸多挑战。我们的新品细胞因子套装,正是在深入理解科研需求的基础上,通过“三重精准” 设计,筛选高品质的细胞因子、优化细胞因子浓度、优化实验操作步骤,可有效稳定地获取诱导培养的DC细胞。

 

精准配伍:黄金比例,协同增效

套装核心包含三种关键细胞因子:重组小鼠GM-CSF 、重组小鼠IL-4和重组小鼠TNF-α。

  • GM-CSF:强力促进骨髓祖细胞向树突状细胞系增殖与分化,是BMDC生成的“发动机”。

  • IL-4:有效抑制巨噬细胞过度生长,同时促进单核细胞向未成熟树突状细胞定向分化,是保证细胞纯度的“方向盘”。

  • TNF-α:一种早期炎症细胞因子,诱导BMDC的完全成熟,并增强其抗原递呈能力。它还能够激活NF-κB信号通路,促进DC产生其他炎症介质和细胞因子。

 

我们通过大量实验数据优化,确定了三者之间的最佳浓度配比,确保在诱导过程中既能实现细胞的高效扩增,又能最大限度地保证DC的表型与功能,有效提升CD11c+阳性细胞的得率与纯度。

 

高品质HiActi®细胞因子:高纯度、高活性、低内毒素

  • 超高纯度:蛋白纯度>98%,最大限度减少杂蛋白对细胞生长的干扰。

  • 高活性:经严格的细胞增殖/抑制试验验证,确保每一批次都具有极高的生物学活性,结果稳定可靠。

  • 极低内毒素:内毒素含量严格控制在<1.0 EU/μg,有效避免因内毒素引起的非特异性细胞激活,确保您获得的是功能状态明确的“静息”或“特定激活状态”的BMDC。

 

精准便捷:省心省力

只需按照我们的标准化操作指南(SOP),即可轻松开启实验,极大节省了准备时间,并显著降低了操作误差。

 

PART.3

实战方案——小鼠BMDC诱导分化方案

 图2.经典的BMDC 制备方法简图

 

小鼠骨髓细胞的获得

01

小鼠(6-10周龄)颈椎脱臼法处死,手术取出所有股骨和胫骨,并剪刀和镊子将骨周围的肌肉组织尽量去除干净;
02

将骨移至超净台内,并用盛有70%酒精的无菌培养皿浸泡2-5min,以消毒灭菌,然后用无菌的PBS洗2次;
03

将骨移入另一个盛有PBS 的新培养皿中,用剪刀剪去骨两端,再用注射器抽取PBS,针头分别从骨两端插入骨髓腔,反复冲洗出骨髓至培养皿中,直至骨完全变白; 
04

收集骨髓悬液,用200目尼龙网滤; 
05

过滤液1200rpm 离心5min,弃上清;
06

加入2 ml氯化铵红细胞裂解液(1x),重悬细胞,室温孵育3-5min,最长10min;
07

加入10 ml PBS 中和裂解液的作用,然后1200 rpm 离心5min,弃上清;
08

PBS 洗1 次,然后用含10% FBS的RPMI1640培养液重悬细胞,至此已获得小鼠骨髓细胞。

 

氯化铵红细胞裂解液的配制: 
1)先配制10x的贮存液,配法如下:称取82.9g NH4Cl,10.0gKHCO3和0.37g Na2EDTA,溶于1L的蒸馏水中,0.22μm滤膜过滤除菌,4℃储存6个月;
2)临用前,将10x贮存液用无菌蒸馏水1 : 9稀释成1x工作液即可。
【注】:因氯化铵红细胞裂解液对骨髓细胞有一定的伤害作用,所以要尽量缩短溶血时间。

 

BMDC的诱导分化

01

用培养基将细胞密度调整为1×10^6/mL;
02

铺至24 孔培养板内,每孔1ml 细胞,同时加入重组小鼠GM-CSF (20ng/ml)和IL-4 (20ng/ml),37℃,5% CO2培养箱培养,此为培养的第0天;
03

每2天轻轻摇晃培养板,然后1/2体积更换新鲜培养液,并补足细胞因子;
04

D6收集悬浮细胞和贴壁细胞,1200rpm离心5分钟,弃上清; 
05

用含10% FBS的RPMI 1640完全培养液重悬细胞并计数,然后调整细胞浓度至1×106/ml,并加入重组小鼠GM-CSF (20 ng/ml)和IL-4 (20ng/ml),此为不完全成熟的BMDC;
06

细胞铺板至100mm培养皿(每皿最多10ml)或6孔培养板(2m/孔) ;
07

37℃,5% CO2培养箱继续培养1-2天。

 

BMDC的完全成熟

01

在D8,用将以上获得的BMDC以1200rpm离心5min,弃上清;
02

RPMI完全培养液重悬沉淀,计数后调整细胞浓度为1×106/ml;同时加入TNF-α (20ng/mL),GM-CSF (20ng/mL)和IL-4 (20ng/mL);
03

37℃,5% CO2 培养箱培养2天;
04

D10收集悬浮细胞和贴壁生长的细胞,即为成熟树突状细胞。

 

PART.4

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组分名称

表达系统

92641ES08

92641ES50

92641ES60

Mouse GM-CSF Protein

E.coli

5 μg

50 μg

100 μg

Mouse IL-4 Protein

E.coli

5 μg

50 μg

100 μg

Mouse TNF-α Protein

E.coli

5 μg

20 μg

50 μg

 

试用装申请活动

测试装货号:92641ES08   

活动要求:需提交《结果反馈表》
活动规则:参与即视为同意我司可用于市场宣传;反馈数据须真实,如明显造假取消资格。
试用装申请方式:扫描下方二维码,填写相关信息后,5981cc万洲国际工作人员会联系您。数量有限,先到先得。

 

image.png

 

相关文献:

1.Anna C. Filley1 and Mahua Dey. Dendritic cell based vaccination strategy: an evolving paradigm.J Neurooncol. 2017 Jun; 133(2): 223–235.

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