5981cc万洲国际外泌体DNA分离试剂盒专为从细胞培养上清或体液（如血清/血浆）来源的外泌体而开发。采用优化的裂解液，可高效释放经超速离心、化学沉淀、免疫捕获或分子排阻法等不同方法所得外泌体中的DNA，通过核酸特异吸附柱进行纯化与洗脱，操作便捷高效。最终获得的高纯度外泌体DNA可直接用于下游应用，包括实时荧光定量PCR、基因突变检测、新一代测序及基因芯片分析。
该产品适用于细胞培养上清或体液（血清/血浆）。
| 组分编号 | 组分名称 | 41229ES30 | 41229ES50 | 保存条件 |
| 41229-A | 蛋白酶K（20mg/mL） | 600 μL | 1.0 mL | 2-8℃ |
| 41229-B | 裂解液R（Lysis Buffer R） | 7 mL | 10 mL | RT |
| 41229-C | 洗涤液A（Wash Buffer A） | 15mL | 25 mL | RT |
| 41229-D | 洗涤液B（Wash Buffer B）* | 6 mL | 10 mL | RT |
| 41229-E | 洗脱液E（Elution Buffer） | 1.0 mL | 2.0 mL | RT |
| 41229-F | 吸附柱（Spin columns）2.0ml /收集管（Collection Tubes 2.0 ml） | 30套 | 50套 | RT |
| 41229-G | 1.5ml 离心管（Centrifuge Tubes 1.5 ml） | 30个 | 50个 | RT |
*使用前在洗涤液B (Wash Buffer B)中加入4倍体积无水乙醇，混匀，并在瓶标签上标记“√”，每次使用后需拧紧瓶盖。
使用说明
1. 外泌体DNA释放
取200 μL分离的外泌体溶液加入到1.5 mL离心管中，然后加10 μL（细胞上清来源外泌体）/20 μL（血液来源外泌体）蛋白酶K溶液，再加入200 μL裂解液R涡旋仪混匀后，盖好盖子放入56℃水浴锅温育10 min。
备注：若外泌体不足200 μL，可用1x PBS补齐到200 μL即可。建议细胞上清初始体积≥20 mL；血清/血浆≥1 mL。
2. 外泌体DNA结合
取出裂解的外泌体上下颠倒数下，然后加入400 μL预冷的无水乙醇，-20℃冰箱静置10 min。将上述溶液分2次转移至纯化柱中，每次转移体积400 μL，室温，12000 rpm/min，离心30s，倒掉收集管中的滤液，将吸附柱放入收集管中。重复上述操作至样品全部转移至纯化柱中。
3. 外泌体DNA洗涤
纯化柱中加入500 μL洗涤液A，静置2 min，室温12000 rpm/min，离心1 min，弃废液。纯化柱中加入500 μL洗涤液B（使用前加入指定量的无水乙醇），静置2 min，室温12000 rpm/min，离心1 min，弃废液。重复加入洗涤液B一次，共两次。空纯化柱继续室温12000 rpm/min，离心1 min，取出纯化柱放入收集管，打开纯化柱盖子放置5 min，将乙醇挥发干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的洗涤液去除，洗涤液中的乙醇残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR 等）实验。
4. 外泌体 DNA 洗脱
将洗脱液E放入到56 ℃水浴锅中预热10-15 min，将纯化柱转移至新的1.5 mL离心管中（试剂盒提供），然后将热的洗脱液E取30 μL滴加到纯化柱中心膜上，静置2 min立即放入离心机室温12000 rpm/min，离心2 min。离心得到的下层洗脱液再次加入纯化柱中静置2 min后室温12000 rpm/min，离心2 min。收集管中的液体即为提取的外泌体DNA，可直接应用于下游实验或保存在-80 ℃。
注意：洗脱液E体积不应太小，体积过小会影响回收效率，太大会影响DNA浓度，一般推荐30-100 μL。
温馨提示：实验前将水浴锅打开温度设置在56 ℃。
冰袋运输，2-8℃保存（按照试剂盒成分分别保存），有效期1年。
