HieffNGS®C102P4MouseITS/ETSDepletionProbe是针对小鼠的45SITS/ETS区域设计的探针，能够有效去除小鼠的 45SITS/ETS区域。该产品搭配HieffNGS®MaxUpHumanrRNADepletionKit（rRNA&ITS/ETS）(Yeasen#12257)使用， 有效去除总RNA中的rRNA及小鼠的45SITS/ETS区域以保留信使RNA（mRNA）和其他非编码RNA。该试剂盒对于完整 和部分降解的总RNA均具有良好的rRNA去除效果。经rRNA&ITS/ETS去除所获得的RNA样本可用于高通量测序分析 mRNA和非编码RNA，可显著提高测序结果中有效数据比例，也可用于cDNA合成或其它下游应用。 适用范围 适用于小鼠血液来源的100ng~1μg总RNA样品；适用于完整或部分降解RNA样品。 产品组分 组分编号和名称13528ES0813528ES2413528ES96 MouseITS/ETSProbe8μL24μL96μL

干冰运输，-20°C存放，有效期一年。 注意事项 1.请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理，推荐使用ThermoFisher公司的RNAZapTM高效核酸去除喷 雾去除RNA酶污染。 2.RNA样品应不含基因组DNA污染，若样品中有gDNA残留，应先进行DNaseI消化并纯化后再用于本试剂盒。 3.RNA样品最大投入体积为9μL，若样品体积较大，可先进行浓缩。 4.本产品仅用作科研用途！ 自备材料 1.RNA纯化磁珠：HieffNGS®Cleaner（Cat#12602）或其他等效产品。 2.qRT-PCR质检rRNA去除效率：Hieff®qPCRSYBRGreenMasterMix(NoRox)（Cat#11201）或其他等效产品； 3.其他材料：无水乙醇、无菌超纯水、低吸附枪头、PCR管、磁力架、PCR仪等。 操作步骤 1.探针杂交 1.1将探针和杂交Buffer从-20°C取出，解冻后颠倒混匀，置于冰上备用。 1.2准备RNA样品：根据投入量和样品浓度，计算RNA取样体积，用NucleasefreeH2O稀释至9μL。 1.3按照表1于200μLPCR管中配制rRNA去除反应体系。 YeasenBiotechnology(Shanghai)Co.,Ltd. Hotline：400-6111-883 E-mail:order@yeasen.com 网址：www.yeasen.com第2页，共4页 表1探针杂交反应体系 名称体积（μL） HybridizationBuffer3 HumanProbeMix(rRNA&ITS/ETS)2 MouseITS/ETSProbe1 TotalRNA9（100ng~1μg） Total15 1.4使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底。 1.5将上述PCR管置于PCR仪中，按照表2所示反应程序，进行探针杂交反应。 表2探针杂交反应程序 温度时间 热盖105°COn 95℃2min 95℃-22℃0.1℃/s 22℃5min 4℃hold 2.RNaseH消化 2.1将RNaseH消化试剂从-20°C取出，解冻后颠倒混匀，置于冰上备用。按照表3所示，配制RNaseH消化反应体系。 表3RNaseH消化反应体系 名称体积（μL） RNaseHBuffer3 RNaseH2 上步产物15 Total20 2.2使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底。 2.3将上述PCR管置于PCR仪中，设置反应程序：(热盖关)37℃，30min；4℃，hold，进行RNaseH消化反应。 3.DNaseI消化 3.1将DNaseI消化试剂从-20°C取出，解冻后颠倒混匀，置于冰上备用。按照表4所示，配制DNaseI消化反应体系。 表4DNaseI消化反应体系 名称体积（μL） DNaseIBuffer27.5 DNaseI2.5 上一步产物20 Total50 3.2使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底。 3.3将上述PCR管置于PCR仪中，设置反应程序：(热盖关)37℃，30min；4℃，hold，进行DNaseI消化反应。 4.RNA纯化 4.1准备工作：将HieffNGS®RNACleaner（Cat#12602）磁珠由冰箱中取出，室温平衡至少30min。用NucleasefreeH2O 配制80%乙醇。 4.2涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。 4.3吸取110μLHieffNGS®RNACleaner（2.2×，Beads:DNA=2.2:1）至上一步产物中，移液器充分吹打混匀，室温孵育5min。 4.4将PCR管置于磁力架中分离磁珠和液体，待溶液澄清后（约3min），小心移除上清。 4.5保持PCR管始终置于磁力架中，加入200μLNucleasefreeH2O新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠，室温孵育30sec后， 小心移除上清。 4.6重复步骤4.5，总计漂洗两次。用10μL移液器吸干净残留液体。YeasenBiotechnology(Shanghai)Co.,Ltd. Hotline：400-6111-883 E-mail:order@yeasen.com 网址：www.yeasen.com第3页，共4页 4.7保持PCR管始终置于磁力架中，室温下开盖干燥磁珠（5~10min）。 4.8RNA洗脱：将PCR管从磁力架上取下，加入11μLNucleasefreeH2O（或使用适合下游实验的相应体积NucleasefreeH2O 或洗脱缓冲液），使用移液器轻轻吹打至充分混匀，室温静置5min。 4.9将PCR管短暂离心并置于磁力架中静置，待溶液澄清后（约3min），小心移取10μL上清（可根据步骤4.8选择的实 际洗脱体积进行相应调整）至新的NucleasefreePCR管中。 【注】洗脱后的样品请立即进行下游实验，或置于-80℃存放。YeasenBiotechnology(Shanghai)Co.,Ltd. Hotline：400-6111-883 E-mail:order@yeasen.com 网址：www.yeasen.com第4页，共4页 备忘录： ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ———————————————————————————————————————— ————————————————————————————————————————