Hieff NGS® Ultima Dual-mode mRNA Library Prep Kit for MGI®是针对MGI®高通量测序平台专门研发的用于mRNA转录组文库构建试剂盒，本试剂盒将cDNA二链合成与Endprep、dA-tailing进行合并，极大地缩减建库时间。二链合成模块配有两种buffer，客户可根据需要进行常规建库或链特异性建库。本产品适用于起始模板为10 ng-4 μg不同来源真核生物总RNA样本。经过mRNA分离、片段化、双链cDNA合成、末端修复、加A尾、接头连接和文库扩增，总RNA样品最终转化为适用于华大平台测序的文库。
试剂盒包含两个独立模块，BOX-I的核心为纯化mRNA所需的oligo(dT)磁珠。BOX-II包含mRNA片段化试剂，反转录试剂，常规和链特异性dscDNA合成，以及后续建库所需的所有试剂。其中链特异性二链合成Buffer中将dTTP替换为dUTP，使cDNA第二链中掺入dUTP，而本试剂盒使用的高保真DNA聚合酶无法扩增含尿嘧啶的DNA模板，实现链特异性。提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。
冰袋运输。效期一年。存储温度如下，切不可搞错！
Box I：2-8℃保存；Box II：-20℃保存。
Q:13330 和 13331 有什么区别？
A: 13330 是 13331 的升级版本，相比于 13331 建库试剂盒，13330 试剂盒对打断 buffer， 一链合成模块，二链合成/末修/加A 模块和连接模块都做了优化，文库转化率更高。
Q: 13330 试剂盒内包含 mRNA capture beads 吗？
A: 是的，包含。但是不包含DNA 纯化磁珠。
Q: 13330 适用于哪些样本？
A: 适用于起始模板量为 0.1-4 μg（体积≤50 μL）的高质量动物、植物和真菌等真核生物的总RNA。
Q: mRNA 文库构建分为链特异性文库和常规文库，这两个文库的区别是什么？
A: 操作：在合成第二条链时常规 mRNA 文库加入dTTP,链特异性 mRNA 文库加入 dUTP
原理：链特异性 RNA 文库构建在合成第二条链时加入的 dNTPs 中用 dUTP 代替 dTTP，使cDNA 第二条链中包含碱基 U。在接头连接之后的文库 PCR 扩增的步骤使用特异性酶，利用此酶只扩增无U 碱基的cDNA 链的特性，可去除cDNA 第二条链，只保留cDNA 第一条链，扩增之后得到的文库就保留了 RNA 方向性。
Q：13330 接头用量推荐
A:
Q：mRNA 建库流程中的 safe stopping points？
A: 一链/二链合成后，可在-20℃保存≤48 h；接头连接后纯化产物可在 4℃保存≤48 h
Q: 收到试剂盒后，误将 mRNA Capture Beads 放置 -20 ℃保存，是否还可以继续使用？
A: 低温会破坏磁珠，不可再继续使用。
Q: 13330 mRNA 建库试剂盒兼容小RNA 建库吗？
A: 不兼容。因为 small RNA 的长度仅为 22 nt 左右，而本试剂盒中磁珠抓取片段最低为 100bp 以上，无法有效富集到 small RNA 片段。
Q: 13330 mRNA 试剂盒兼容低质量样本建库吗？
A: 不兼容。本试剂盒原理基于poly(T)磁珠吸附 mRNA 3’端A 尾回收 mRNA ，低质量样本如 FFPE（mRNA 断裂，无完整的 poly A 结构）不适用。针对低质量的样本可以选择总RNA 建库的试剂盒，搭配去除rRNA 的盒子一起使用。
